Ujian Semester

NAMA                        : Merita

NIM                            : A1C109007

Matakuliah                  : Kimia Bahan Alam

Kredit                          : 2 SKS

Dosen                          : Dr. Syamsurizal, M.Si

Hari/Tanggal               : Sabtu, 22 Desember 2012

Waktu                         : 29 Desember 2012

PETUNJUK : Ujian ini open book. Tapi tidak diizinkan mencontek, bilamana ditemukan, maka anda dinyatakan GAGAL. Jawaban anda diposting di bolg masing-masing.

1.      Jelaskan dalam jalur biosintesis triterpenoid, identifikasikanlah faktor-faktor penting yang sangat menentukan dihasilkannya triterpenoid dalam kuantitas yang banyak.

2.      Jelaskan dalam penentuan struktur flavonoid kekhasan signal dan identifikasi serapan dengan menggunakan spektrum IR dan NMR. Berikan dengan contoh sekurang-kurangnya 2 struktur yang berbeda.

3.      Dalam isolasi alkaloid, pada tahap awal dibutuhkan pada kondisi asam atau basa. Jelaskan dasar penggunaan reagen tersebut, dan berikan contohnya sekurang-kurangnya 3.

4.      Jelaskan keterkaitan antara biosintesis, metode isolasi, dan penentuan struktur senyawa bahan alam. Berikan contohnya.

JAWABAN

1.      Menurut saya faktor-faktor penting yang sangat menentukan dihasilkannya triterpenoid dalam kuantitas yang banyak adalah pada pembentukan cincin (siklik)dalam biosintesis ini sendiri serta pengurangan jumlah atom C yang mengakibatkan pembentukan molekul dengan jumlah atom C kurang dari 30 seperti steroid (C₂₇). Apabila pengurangan aton C ini dapat dihindari, maka senyawa triterpenoid yang terbentuk akan lebih banyak. Hal ini berdasarkan atas uraian dibawah ini.

Triterpenoid dibiosintesis dari 6 unit isopren, dan tersusun atas C30 asiklik yang merupakan prekursor dari squalen.  Perbedaan pembentukan cincin (siklisasi)  akan memberikan perbedaan tipe dari terpenoid.  Lebih dari 4000 terpenoid alami telah diisolasi, dan lebih dari 40 kerangka dasar yang teridentifikasi.  Triterpenoid terbagi atas 2 kelompok besar yaitu tetrasiklik dan pentasiklik.

Pada biositesis selanjutnya, dapat terjadi pengurangan jumlah atom C menjadi molekul dengan jumlah atom C kurang dari 30.  Sebagai contoh ádalah pembentukan senyawa golongan steroid (C₂₇).  Banyak senyawa golongan triterpenoid bereaksi dengan gula membentuk glikosida.  Triterpenoid bebas merupakan komponen penyusun resin, lateks, dan kutikula dari tanaman.

Triterpenoid yang secara ekologi penting misalnya cucurbitacins dan quassinoid.  Golongan saponin triterpenoid dapat mengakibatkan melisisnya darah. Kelompok lain dari triterpenoid ádalah phytoecdysones yang digunakan untuk metamorfose pada serangga.

 

                            Contoh Senyawa Quassinoid (triterpenoid)

2.      Spektrum inframerah Isolat SA-DE-1

Dalam larutan metanol senyawa ini memberikan serapan pita I 344 nm dan pita II 269 nm. Dengan melihat bercak ungu

gelap di bawah sinar ultra violet dan berubah menjadi hijau kuning setelah diberikan uap amonia, maka senyawa ini

mengarah pada flavon, kalkon atau flavonol.

Pada penambahan natrium hidroksida terjadi pergeseran batokromik pita I sebesar 62 nm dan tanpa penurunan kekuatan,

sehingga menunjukkan adanya OH-4’.

Penambahan natrium asetat menunjukkan adanya OH-7 dan mungkin ada oksigenasi pada 6 atau 8, ini dapat dilihat

dengan adanya pergeseran pita II kurang dari 5 nm. Pergeseran batokromik 4 nm pada pita II dengan adanya

penambahan natrium asetat dan asam borat menunjukkan adanya orto dihidroksi pada cincin A (6, 7 atau 7, 8).

Tidak berubahnya serapan maksimum pita II dengan penambahan aluminium klorida dan asam klorida menunjukkan

kemungkinan adanya OH-5 dengan gugus prenil pada atom C nomor 6.

Dari data spektrum ultraviolet tersebut senyawa SA-DE-4 mengarah ke senyawa flavonol dengan OH-3

Spektrum inframerah Isolat SA-DE-2

tersubstitusi dan substitusi OH terdapat pada posisi atom C nomor 5, 7, 8, 4’, dan kemungkinan ada gugus prenil pada

atom C nomor 6.

Senyawa SA-DE-5 mempunyai pola spektrum ultraviolet yang sama dengan SA-DE-4, jadi kemungkinan kedua senyawa

tersebut mempunyai struktur yang mirip hanya perbedaannya pada SA-DE-5 mempunyai ortho-dihidroksi pada cincin

B, hal ini terlihat adanya pergeseran batokromik 15 nm pada pita I setelah penambahan natrium asetat dan asam borat.

Dalam larutan metanol senyawa ini memberikan serapan maksimum pita I 346 nm dan pita II 268 nm. Warna bercak

ungu gelap di bawah sinar ultraviolet dan berubah sedikit bila diberikan uap amonia. Dari data tersebut senyawa ini

mengarah kepada struktur flavon, flavonol OH-3 tersubstitusi atau khalkon.

Tetapi dengan adanya OH-7 (terlihat dengan adanya pergeseran batokromik pita II setelah penambahan natrium asetat),

maka senyawa tersebut mengarah ke flavonol OH-3 tersubstitusi atau flavon. Pada penambahan natrium hidroksida

maka terjadi pergeseran batokromik pita I dan tidak terjadi penurunan intensitas sebesar 53 nm, hal ini menunjukkan

adanya OH-4’ bebas.

Tidak terjadinya perubahan serapan maksimum Pita I pada penambahan aluminium klorida dan asam klorida

menunjukkan kemungkinan adanya OH-5 dengan gugus prenil pada posisi atom C nomor 6.

Dari data spektrum tersebut, maka senyawa SA-DE-6 mengarah pada struktur flavon atau flavonol OH-3 tersubstitusi,

dengan substitusi OH pada atom C nomor 5, 7, 4’ dan kemungkinan dengan gugus prenil pada atom C nomor 6.

repository.ui.ac.id/.../8461091b11768d82e5c01f3d66b0aca

3.      Dalam isolasi alkaloid, pada tahap awal dibutuhkan pada kondisi asam dengan tujuan untuk mengekstraksi alkaloid yang terkandung didalam sampel. Kemudian, setelah didapat ekstrak nya, dibasakan lagi dengan tujuan untuk menghilangkan senyawa-senyawa selain koloid yang terkandung dalam sampel.

Contoh reagen asam dan basa yang digunakan dalam isolasi alkaloid yaitu HCl, H₂SO₄, dan NH₄OH.

4.      Menurut saya, keterkaitan antara biosintesis, metode isolasi, dan penentuan struktur senyawa bahan alam adalah sebagai berikut:

Untuk mempelajari biosintesis suatu senyawa bahan alam yang didapat dari suatu sampel, maka perlu diketahui struktur senyawa yang akan disintesis. Penentuan struktur senyawa bahan alam ini dapat dilakukan dengan berbagai metode, diantaranya yaitu menggunakan spektrum IR, GC-MS, NMR, dan lain-lain.  Namun, sebelum menentukan struktur senyawa ini langkah awal yang harus dilakukan adalah mengisolasi senyawa bahan alam dengan metode yang sesuai.

Jadi, dapat disimpulkan keterkaitan antara biosintesis, metode isolasi, dan penentuan struktur senyawa bahan alam dalam bentuk langkah kerja adalah:

   Isolasi

               ǀ

Penentuan struktur

              ǀ

       Biosintesis

  

Contoh:

Nikotin adalah senyawa kimia organik kelompok alkaloid yang dihasilkan secara alami pada berbagai macam tumbuhan, terutama suku terung-terungan (Solanaceae) seperti tembakau. Nikotin berkadar 0,3 sampai 5,0% dari berat kering tembakau yang berasal dari hasil biosintesis di akar dan terakumulasi di daun.

Langkah awal yang dilakukan sebelum peneliti dapat mempelajari biosintesis pada nikotin adalah mengisolasi nikotin dari daun tembakau kering terlebih dahulu. Isolasi nikotin dari daun tembakau kering dengan cara soxhletasi menggunakan pelarut metanol kemudian dilakukan penggaraman dengan asam dan ekstraksi alkaloid dengan basa. Ekstrak yang diperoleh kemudian dimurnikan dengan KLT, dan kromatografi kolom.

Setelah diisolasi, nikotin yang dihasilkan dianalisis menggunakan IR, UV, dan GC-MS sebagai penentuan struktur nikotin.

Dari hasil analisis KLT menggunakan larutan pengembang metanol didapatkan harga Rf = 0,725.

Hasil analisis spektra IR menunjukkan adanya gugus amina tersier aromatis, gugus metil, gugus amina tersier alifatis, dan ikatan C-H aromatis.

Hasil kromatogram GC-MS menunjukkan senyawa nikotin muncul pada puncak dengan waktu retensi = 9,245 s dan indeks kemiripan 63 %, hal ini menunjukkan bahwa dalam daun tembakau terdapat alkaloid nikotin.

Hasil dari spektrofotometer UV menghasilkan panjang gelombang maksimum 206 nm yang menunjukkan adanya kearomatisan dari cincin piridin dalam nikotin.

Setelah diketahui struktur nikotin, maka dapat dipelajari bagaimana biosintesis nikotin tersebut dalam tanaman tembakau.

jawaban ujian semester

Ujian Semester

NAMA                        : Merita

NIM                            : A1C109007

Matakuliah                  : Kimia Bahan Alam

Kredit                          : 2 SKS

Dosen                          : Dr. Syamsurizal, M.Si

Hari/Tanggal               : Sabtu, 22 Desember 2012

Waktu                         : 29 Desember 2012

PETUNJUK : Ujian ini open book. Tapi tidak diizinkan mencontek, bilamana ditemukan, maka anda dinyatakan GAGAL. Jawaban anda diposting di bolg masing-masing.

1.      Jelaskan dalam jalur biosintesis triterpenoid, identifikasikanlah faktor-faktor penting yang sangat menentukan dihasilkannya triterpenoid dalam kuantitas yang banyak.

2.      Jelaskan dalam penentuan struktur flavonoid kekhasan signal dan identifikasi serapan dengan menggunakan spektrum IR dan NMR. Berikan dengan contoh sekurang-kurangnya 2 struktur yang berbeda.

3.      Dalam isolasi alkaloid, pada tahap awal dibutuhkan pada kondisi asam atau basa. Jelaskan dasar penggunaan reagen tersebut, dan berikan contohnya sekurang-kurangnya 3.

4.      Jelaskan keterkaitan antara biosintesis, metode isolasi, dan penentuan struktur senyawa bahan alam. Berikan contohnya.

JAWABAN

1.      Menurut saya faktor-faktor penting yang sangat menentukan dihasilkannya triterpenoid dalam kuantitas yang banyak adalah pada pembentukan cincin (siklik)dalam biosintesis ini sendiri serta pengurangan jumlah atom C yang mengakibatkan pembentukan molekul dengan jumlah atom C kurang dari 30 seperti steroid (C₂₇). Apabila pengurangan aton C ini dapat dihindari, maka senyawa triterpenoid yang terbentuk akan lebih banyak. Hal ini berdasarkan atas uraian dibawah ini.

Triterpenoid dibiosintesis dari 6 unit isopren, dan tersusun atas C30 asiklik yang merupakan prekursor dari squalen.  Perbedaan pembentukan cincin (siklisasi)  akan memberikan perbedaan tipe dari terpenoid.  Lebih dari 4000 terpenoid alami telah diisolasi, dan lebih dari 40 kerangka dasar yang teridentifikasi.  Triterpenoid terbagi atas 2 kelompok besar yaitu tetrasiklik dan pentasiklik.

Pada biositesis selanjutnya, dapat terjadi pengurangan jumlah atom C menjadi molekul dengan jumlah atom C kurang dari 30.  Sebagai contoh ádalah pembentukan senyawa golongan steroid (C₂₇).  Banyak senyawa golongan triterpenoid bereaksi dengan gula membentuk glikosida.  Triterpenoid bebas merupakan komponen penyusun resin, lateks, dan kutikula dari tanaman.

Triterpenoid yang secara ekologi penting misalnya cucurbitacins dan quassinoid.  Golongan saponin triterpenoid dapat mengakibatkan melisisnya darah. Kelompok lain dari triterpenoid ádalah phytoecdysones yang digunakan untuk metamorfose pada serangga.

 

                            Contoh Senyawa Quassinoid (triterpenoid)

2.      Spektrum inframerah Isolat SA-DE-1

Dalam larutan metanol senyawa ini memberikan serapan pita I 344 nm dan pita II 269 nm. Dengan melihat bercak ungu

gelap di bawah sinar ultra violet dan berubah menjadi hijau kuning setelah diberikan uap amonia, maka senyawa ini

mengarah pada flavon, kalkon atau flavonol.

Pada penambahan natrium hidroksida terjadi pergeseran batokromik pita I sebesar 62 nm dan tanpa penurunan kekuatan,

sehingga menunjukkan adanya OH-4’.

Penambahan natrium asetat menunjukkan adanya OH-7 dan mungkin ada oksigenasi pada 6 atau 8, ini dapat dilihat

dengan adanya pergeseran pita II kurang dari 5 nm. Pergeseran batokromik 4 nm pada pita II dengan adanya

penambahan natrium asetat dan asam borat menunjukkan adanya orto dihidroksi pada cincin A (6, 7 atau 7, 8).

Tidak berubahnya serapan maksimum pita II dengan penambahan aluminium klorida dan asam klorida menunjukkan

kemungkinan adanya OH-5 dengan gugus prenil pada atom C nomor 6.

Dari data spektrum ultraviolet tersebut senyawa SA-DE-4 mengarah ke senyawa flavonol dengan OH-3

Spektrum inframerah Isolat SA-DE-2

tersubstitusi dan substitusi OH terdapat pada posisi atom C nomor 5, 7, 8, 4’, dan kemungkinan ada gugus prenil pada

atom C nomor 6.

Senyawa SA-DE-5 mempunyai pola spektrum ultraviolet yang sama dengan SA-DE-4, jadi kemungkinan kedua senyawa

tersebut mempunyai struktur yang mirip hanya perbedaannya pada SA-DE-5 mempunyai ortho-dihidroksi pada cincin

B, hal ini terlihat adanya pergeseran batokromik 15 nm pada pita I setelah penambahan natrium asetat dan asam borat.

Dalam larutan metanol senyawa ini memberikan serapan maksimum pita I 346 nm dan pita II 268 nm. Warna bercak

ungu gelap di bawah sinar ultraviolet dan berubah sedikit bila diberikan uap amonia. Dari data tersebut senyawa ini

mengarah kepada struktur flavon, flavonol OH-3 tersubstitusi atau khalkon.

Tetapi dengan adanya OH-7 (terlihat dengan adanya pergeseran batokromik pita II setelah penambahan natrium asetat),

maka senyawa tersebut mengarah ke flavonol OH-3 tersubstitusi atau flavon. Pada penambahan natrium hidroksida

maka terjadi pergeseran batokromik pita I dan tidak terjadi penurunan intensitas sebesar 53 nm, hal ini menunjukkan

adanya OH-4’ bebas.

Tidak terjadinya perubahan serapan maksimum Pita I pada penambahan aluminium klorida dan asam klorida

menunjukkan kemungkinan adanya OH-5 dengan gugus prenil pada posisi atom C nomor 6.

Dari data spektrum tersebut, maka senyawa SA-DE-6 mengarah pada struktur flavon atau flavonol OH-3 tersubstitusi,

dengan substitusi OH pada atom C nomor 5, 7, 4’ dan kemungkinan dengan gugus prenil pada atom C nomor 6.

(repository.ui.ac.id/.../8461091b11768d82e5c01f3d66b0aca)

3.      Dalam isolasi alkaloid, pada tahap awal dibutuhkan pada kondisi asam dengan tujuan untuk mengekstraksi alkaloid yang terkandung didalam sampel. Kemudian, setelah didapat ekstrak nya, dibasakan lagi dengan tujuan untuk menghilangkan senyawa-senyawa selain koloid yang terkandung dalam sampel.

Contoh reagen asam dan basa yang digunakan dalam isolasi alkaloid yaitu HCl, H₂SO₄, dan NH₄OH.

4.      Menurut saya, keterkaitan antara biosintesis, metode isolasi, dan penentuan struktur senyawa bahan alam adalah sebagai berikut:

Untuk mempelajari biosintesis suatu senyawa bahan alam yang didapat dari suatu sampel, maka perlu diketahui struktur senyawa yang akan disintesis. Penentuan struktur senyawa bahan alam ini dapat dilakukan dengan berbagai metode, diantaranya yaitu menggunakan spektrum IR, GC-MS, NMR, dan lain-lain.  Namun, sebelum menentukan struktur senyawa ini langkah awal yang harus dilakukan adalah mengisolasi senyawa bahan alam dengan metode yang sesuai.

Jadi, dapat disimpulkan keterkaitan antara biosintesis, metode isolasi, dan penentuan struktur senyawa bahan alam dalam bentuk langkah kerja adalah:

   Isolasi

               ǀ

Penentuan struktur

              ǀ

       Biosintesis

Contoh:

Nikotin adalah senyawa kimia organik kelompok alkaloid yang dihasilkan secara alami pada berbagai macam tumbuhan, terutama suku terung-terungan (Solanaceae) seperti tembakau. Nikotin berkadar 0,3 sampai 5,0% dari berat kering tembakau yang berasal dari hasil biosintesis di akar dan terakumulasi di daun.

Langkah awal yang dilakukan sebelum peneliti dapat mempelajari biosintesis pada nikotin adalah mengisolasi nikotin dari daun tembakau kering terlebih dahulu. Isolasi nikotin dari daun tembakau kering dengan cara soxhletasi menggunakan pelarut metanol kemudian dilakukan penggaraman dengan asam dan ekstraksi alkaloid dengan basa. Ekstrak yang diperoleh kemudian dimurnikan dengan KLT, dan kromatografi kolom.

Setelah diisolasi, nikotin yang dihasilkan dianalisis menggunakan IR, UV, dan GC-MS sebagai penentuan struktur nikotin.

Dari hasil analisis KLT menggunakan larutan pengembang metanol didapatkan harga Rf = 0,725.

Hasil analisis spektra IR menunjukkan adanya gugus amina tersier aromatis, gugus metil, gugus amina tersier alifatis, dan ikatan C-H aromatis.

Hasil kromatogram GC-MS menunjukkan senyawa nikotin muncul pada puncak dengan waktu retensi = 9,245 s dan indeks kemiripan 63 %, hal ini menunjukkan bahwa dalam daun tembakau terdapat alkaloid nikotin.

Hasil dari spektrofotometer UV menghasilkan panjang gelombang maksimum 206 nm yang menunjukkan adanya kearomatisan dari cincin piridin dalam nikotin.

Setelah diketahui struktur nikotin, maka dapat dipelajari bagaimana biosintesis nikotin tersebut dalam tanaman tembakau.

biosintesis kolesterol

biosintesis kolestrol dibagi dalam tiga tahap deretan reaksi pembentukan antara lain :

1.     Pembentukan senyawa intermediate mevalonat.

Diawali dengan reaksi pengabunggan 2 molekul asetil-SKoA, yang dikatalis oleh enzim tiolase, dan dihasilkan asetoasetil-SKoA. Selanjutnya, asetoasetil-SKoA bereaksi dengan 1 molekul asetil-SKoA lagi membentuk senyawa β-OH, β-CH3-SKoA (HMG-SKoA). Reaksi ini dikatalis oleh enzim HMG-SKoA sintesis. Akhirnya HMG-SKoA direduksi oleh NADPH + H⁺, yang dikatalis oleh enzim HMG-SKoA reduktase, dan terbentuklah mavelonat.

      

2.     Pembentukan kolestrol (sterol)

Perubahan mevalonat menjadi senyawa sterol pertama berupa lenosterol, berlangsung melelui pembentukan dua senyawa intermediate, berturut-turut berupa senyawa unit isoprenoid dan skualen. Kolestrol diturunkan dari lenosterol melalui pembentukan senyawa intermediate berupa senyawa 14-desmetillano-sterol, zimosterol, ∆⁷, ∆²⁴ –kolestadienol, desmosterol dan pada akhirnya terbentuklah kolestrol.

3.     Pembentukan kolestrol dari skualin

Pada tahap terakhir proses biosintesis kolestrol, skualin bereaksi dengan oksigen menghasilkan skualin-2,3-epoksida. Reaksi ini dikatalis oleh skualin monooksigenase. Selanjutnya skualin-2.3-epoksida mengalami proses suklisasi, yang dikatalis oleh enzim skualin epoksida lanosterol-siklase, menghasilkan lenosterol. [erubahan linosterol menjadi kolestrol berlangsung dengan pelepasan tiga gugus metal (dua atom karbon nomor empat dan satu dari atom karbon nomor 14), reduksi ikatan rangkap dari rantai samping kolestrol, dan perpindahan ikatan rangkap dari posisi-8,9 ke posisi-5,6 dalam cincin B. perubahan linosterol dapat berlangsung melalui salah satu dari dua jalur reaksi, yaitu melalui pembentukan desmoserol atau melalui 7-dehidroksikolestrol.

identifikasi nikotin

       Nikotin adalah senyawa kimia organik kelompok alkaloid yang dihasilkan secara alami pada berbagai macam tumbuhan, terutama suku terung-terungan (Solanaceae) seperti tembakau. Nikotin berkadar 0,3 sampai 5,0% dari berat kering tembakau yang berasal dari hasil biosintesis di akar dan terakumulasi di daun.

       Pada  awalnya, nikotin ditemukan oleh duta besar Prancis, Jean Nicot pada pertengahan abad XIV. Saat itu masyarakat mempercayai nikotin sebagai obat. Setengah abad kemudian baru diketahui bahaya dari nikotin bagi tubuh, namun hanya beberapa orang saja yang mampu berkata tidak terhadap nikotin.

       Nikotin merupakan racun saraf yang potensial dan digunakan sebagai bahan baku berbagai jenis insektisida. Pada konsentrasi rendah, zat ini dapat menimbulkan kecanduan, khususnya pada rokok. Nikotin memiliki daya karsinogenik terbatas yang menjadi penghambat kemampuan tubuh untuk melawan sel-sel kanker, akan tetapi nikotin tidak menyebabkan perkembangan sel-sel sehat menjadi sel-sel kanker.

        Nikotin juga termasuk salah satu zat yang paling adiktif dibandingkan dengan obat-obatan lain. Maka nikotin ini banyak disalahgunakan dalam penggunaannya.

       Selain itu, nikotin merupakan salah satu zat yang dilepaskan ketika seseorang merokok. Ternyata waktu yang dibutuhkan oleh nikotin untuk berjalan dari paru-paru ke otak hanya selama 7 detik saja. Setelah sampai di otak nikotin akan merangsang pelepasan dopamin, yaitu suatu neurotransmitter penting yang terlibat dalam suasana hati (mood), selera makan dan fungsi otak lainnya.

      Ketika seseorang merokok, maka nikotin akan masuk dan mulai menumpuk di dalam tubuh. Lama kelamaan seseorang akan terbiasa dengan nikotin dan jika ia tidak mendapatkan jumlah yang sama maka tubuh akan meminta lebih. Dan biasanya jumlah nikotin yang masuk akan semakin besar atau meningkat.

      Pengguna nikotin bisa dengan cepat menjadi ketergantungan, karena hanya dibutuhkan sedikit rokok untuk bisa membuat seseorang memiliki kecanduan. Jika seseorang tiba-tiba berhenti merokok, maka ia akan mengalami efek balikan (withdrawal effect) seperti cemas dan perubahan suasana hati.

       Salah satu hal yang tak bisa dipungkiri adalah kecanduan nikotin biasanya dimulai sejak seseorang mencoba-coba atau bereksperimen dengan rokok selama setahun. Dalam banyak kasus kondisi ini terkadang sudah dimulai sejak seseorang masih bersekolah atau berusia 13-14 tahun.

       Sebagai obat murni, nikotin hanya memiliki sedikit efek buruk bagi kesehatan fisik seseorang. Tapi zat-zat kimia lain yang terdapat di dalam rokok dan bergabung dengan nikotin inilah yang bisa menimbulkan banyak kerusakan bagi tubuh. Karena ketika sebuah rokok dibakar dan dihisap, maka ada ratusan senyawa kimia yang dihasilkan dan berisiko besar terhadap kesehatan.

Identifikasi Nikotin dari Daun Tembakau Kering

      Isolasi nikotin dari daun tembakau kering dengan cara soxhletasi menggunakan pelarut metanol kemudian dilakukan penggaraman dengan asam dan ekstraksi alkaloid dengan basa. Ekstrak yang diperoleh kemudian dimurnikan dengan KLT, dan kromatografi kolom. Setelah itu dianalisis menggunakan IR, UV, dan GC-MS.

      Dari hasil analisis KLT menggunakan larutan pengembang metanol didapatkan harga Rf = 0,725. 

     

      Hasil analisis spektra IR menunjukkan adanya gugus amina tersier aromatis, gugus metil, gugus amina tersier alifatis, dan ikatan C-H aromatis. 

      

        Hasil kromatogram GC-MS menunjukkan senyawa nikotin muncul pada puncak dengan waktu retensi = 9,245 s dan indeks kemiripan 63 %, hal ini menunjukkan bahwa dalam daun tembakau terdapat alkaloid nikotin. 

      Hasil dari spektrofotometer UV menghasilkan panjang gelombang maksimum 206 nm yang menunjukkan adanya kearomatisan dari cincin piridin dalam nikotin. 

           Cara kerja:

1.       25 gr daun tembakau kering rajangan yang telah dibungkus kertas saring dimasukkan kedalam alat soxhlet, dilakukan ekstraksi dengan menggunakan 300 ml metanol selama 7 jam.sampel yang digunakan adalah 100 gr sehingga ekstraksi dilakukan 4 kali.

2.       Ekstrak/fltrat yang dihasilkan dievaporasi sampai dihasilkan larutan yang pekat atau filtrat tinggal 10% dari volume semula.

3.       Larutan pekat di tuangkan kedalam labu erlenmeyer dan diasamkan dengan H2SO4 2 M sebanyak 25 ml. Larutan diaduk dengan magnetik stirer agar homogen. Larutan diuji dengan kertas lakmus sampai berwarna merah. Kemudian larutan di ekstrak dengan kloroform 25 ml sebanyak 3 kali dengan corong pisah.

4.       Ekstrak yang dihasilkan berada dilapisan bawah diuji dengan reagen dragendrof, positif alkaloid jika timbul endapan orange.

5.       Ekstrak dinetralkan lagi dengan NH4OH, kemudian diekstraksi lagi dengan kloroform sebanyak 3 kali.

6.       Ekstrak yang diperoleh diuapkan dengan dianginkan, kemudian dimurnikan dengan kromatografi kolom dengan silica gel 11,5 gr sebagai fasa diam, panjang kolom 10 cm, diameter kolom 3 cm dan dengan eluen n-heksana dan kloroform, metanol dengan perbandingan 1:0, 7:3, 5:5, 3:7 dan 0:1 masing-masing 10 ml.

7.       Hasil kromatografi kolom dilanjutkan dengan KLT dengan larutan pengembang metanol.

8.       Hasil ekstrak kemudian di uji dengan menggunakan GC-MS, spektrofotometer UV-Vis, dan spektrofotometer IR.